ImageJ的单细胞荧光强度分析

问题描述

软件:FIJI,FIJI Is Just ImageJ

1. 加载图像

将RGB图像,输入至ImageJ,同时,生成图像的备份,避免修改原图:

  • Option + Shift + D:Duplicate生成图像,默认为 原图像名称-1

  • Command + Shift + D:Duplicate生成图像,可选图像名,默认为 原图像名称-1

Raw Duplicate

image-20220824152046010

image-20220824161816270

2. 获取灰度通道

转换颜色空间 RGB -> Lab,分离通道,转换为8-bit图像

  • 转换颜色空间:Image -> Type -> Lab Stack

  • 提取通道:Image -> Color -> Split Channels

  • 转换为 8 Bit 图像:Image -> Type -> 8-bit

图像:

Lab 通道1 8 -bit

image-20220824162651767

image-20220824162609861

image-20220824162745596

3. 平衡、阈值、分水岭操作

将图像平滑,再根据阈值提取Mask,再进行分水岭操作,拆分粘连区域。注意,需要提前修改 BinaryOptions的设置 和 Threshold的设置:

  • 需要提前设置BinaryOptions,否则报错:Process -> Binary -> Options,勾选 Black background
  • 平滑操作:Process -> Smooth (Command + Shift + S)
  • 阈值操作:Image -> Adjust -> Threshold (Command + Shift + T)
  • 分水岭操作:Process -> Binary -> Watershed,深入研究:Plugins -> BioVoxxel -> Watershed Irregular Features

BinaryOptions报错信息:

"Black background" not set in Process>Binary>Options; inverting LUT
Smooth Threshold Threshold - Apply Watershed

image-20220824163307157

image-20220824163401241

image-20220824163422689

image-20220824163559277

参数设置:

BinaryOptions Threshold

image-20220824152007242

image-20220824151157986

4. 分析强度

分析粒子,需要修改 Analyze Particles 的配置 和 Set Measurements 的配置:

  • 分析粒子:Analyze -> Analyze Particles
  • 修改Measurements的设置:Analyze -> Set Measurements
Analyze Particles Set Measurements

image-20220824152712897

image-20220824160847226

输出3个窗口:Results、Summary、ROI Manager

Results Summary ROI Manager

image-20220824164056129

image-20220824164107850

image-20220824164115149

ROI可以迁移到任意图像,Mask、GRAY、RGB都可以,选择不同图像,点击 ROI ManagerShow AllLabels,即可。

Mask GRAY RGB

image-20220824164306343

image-20220824164327805

image-20220824164341624

统计强度:

  1. 修改Measurements的设置:Analyze -> Set Measurements
  2. 清空Results结果:右键 -> Clear Results
  3. 选择灰度图像,再点击 ROI Manager 的 Measure,进行测量
  4. Results的值发生变动,点击 Results -> Summary,统计汇总值,增加Mean、SD、Min、Max等4行
Results Summary

image-20220824164942160

image-20220824165000195

解决方法

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